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Anti-GFP免疫磁珠

簡要描述:Anti-GFP免疫磁珠是粒徑為200nm的納米磁珠表面上共價結(jié)合了大量的高質(zhì)量的鼠源抗GFP單克隆抗體 納米級磁珠提供的超大比表面積,具有更多的結(jié)合位點,磁珠使用量更少,非特異性吸附率低。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-09-06
  • 訪  問  量:199

詳細介紹

品牌Life-iLab/李記生物貨號AP62L212
規(guī)格1mL供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)品描述

Anti-GFP磁珠是粒徑為200nm的納米磁珠表面上共價結(jié)合了大量的高質(zhì)量的鼠源抗GFP單克隆抗體 納米級磁珠提供的超大比表面積,具有更多的結(jié)合位點,磁珠使用量更少,非特異性吸附率低。本產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于細胞裂解物、細胞分泌上清、血清、腹水等樣品中帶有GFP標簽融合蛋白的免疫沉淀(IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。 由于采用磁性分離,使得每次IP和Co-IP可以節(jié)省40%的時間。

訂購信息

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

Anti-GFP免疫磁珠

AP62L212

1 mL

運輸與保存

藍冰運輸。4℃保存,有效期12個月。注:避免凍融或離心磁珠。

技術(shù)參數(shù)

基質(zhì)

硅基磁珠

配體

鼠源抗GFP單克隆抗體

粒徑

200nm

磁珠濃度

10mg/mL

結(jié)合能力

0. 8 mg  GFP標簽融合蛋白/mL 磁珠

適用范圍

 

IP,Co-IP等

使用方法

貼壁細胞樣品:

1. 移去培養(yǎng)基,用PBS洗細胞兩次。

2. 收集細胞至1.5 mL EP管內(nèi),按比例加入IP Lysis/Wash Buffer,同時加入PMSF等相應(yīng)的抑制劑,混勻后置于冰上靜置5-20 min(期間混勻幾次)。

3. 4℃,12000-16000xg,10 min離心收集上清液,置于冰上以備后續(xù)實驗(或置于 -80℃ 長期保存)。

表1.培養(yǎng)皿IP Lysis/Wash Buffer推薦使用體積

培養(yǎng)皿大小/表面積

IP Lysis/Wash Buffer體積

100 mm x 100 mm

500-1000 µL

100 mm x 60 mm

100-300 µL

6孔板

100-200 µL

懸浮細胞樣品:

1. 4℃、500-1000xg、10 min,收集細胞,棄上清。

2. 用PBS 洗細胞一次,即用 PBS 將細胞團重懸,4℃、500-1000xg、5 min,收集細胞,棄上清。

3. 用預(yù)冷的IP Lysis/Wash Buffer重懸細胞。每50 mg 細胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入PMSF等相應(yīng)的抑制劑,混勻后置于冰上靜置5-20 min(期間混勻幾次)。

4. 4℃,12000 -16000xg,10 min離心收集上清液,置于冰上以備后續(xù)實驗(或置于-80℃長期保存)。

血清樣品:

一般建議建議用IP Lysis/Wash Buffer稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為50-150µg/mL,置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

免疫沉淀:

注:為保證磁珠均勻分布,使用前通過反復(fù)顛倒或輕微渦旋混勻瓶中磁珠。

1.   將25-50µL的Anti-GFP免疫磁珠加入1.5 mL離心管中。

2.   向磁珠中加入500 µL預(yù)冷PBS,輕柔混勻。

3.   將離心管放入磁力架中收集磁珠到離心管的一邊,去除上清。

4.   向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻1 min。用磁力架收集磁珠,去除上清。

5.   將含有GFP標記蛋白加入裝有磁珠的離心管中,保持混勻室溫下孵育1-2 h,或4℃ 2-4 h。

6.   用磁力架收集磁珠,除去未結(jié)合的樣品,保存以備分析。

7.   向離心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer,輕柔混勻磁珠5-10min。收集磁珠,棄上清。再重復(fù)洗兩次。

8.   變性洗脫:向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer(1×),將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min。通過磁力架分離磁珠,保留含有目的抗原的上清。注:如需保持蛋白活性,也可采用以下洗脫方式。

低pH洗脫:向離心管中加入100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下孵育離心管5-10 min。通過磁力分離磁珠,保留含有目的抗原的上清。每100 µL洗出液中加入20 µL Neutralization Buffer來中和低pH。

注意事項

1.   本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.   請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠,這些操作會導(dǎo)致磁珠聚集而降低結(jié)合能力。

3.   IP實驗中不同類型的抗體與抗原結(jié)合的親和性是有區(qū)別的,抗體與抗原結(jié)合還會受到IP Lysis/Wash Buffer的影響,因此,如使用本實驗步驟不能獲得最佳的實驗結(jié)果,可自行優(yōu)化操作細節(jié)或者篩選及配制緩沖液進行實驗,推薦使用李記生物相關(guān)試劑,詳見底部。

4.   磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻。磁珠應(yīng)保存在儲存溶液中,防止干燥。

相關(guān)產(chǎn)品推薦

1X PBS (無菌)(貨號:AC08L011)

Western/IP細胞裂解液(帶抑制劑)(貨號:AP01L076)

蛋白示蹤上樣緩沖液(5 x)(貨號:AP14L036)

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。


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